OJFR  >> Vol. 5 No. 2 (June 2018)

    大年夜鲵虹彩病毒病研究停顿
    Advances in Research on Chinese Giant Salamander Iridovirus Disease

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作者:  

苏 杭,江 辉:湖南农业大年夜学植物迷信技巧学院,湖南 长沙

关键词:
大年夜鲵虹彩病毒研究停顿Chinese Giant Salamander Iridovirus Research Progress

摘要:

大年夜鲵虹彩病毒病是今朝唯一的大年夜鲵病毒病,具有高感染性和致逝世率高的特点。研究人员应用现代迷信研究办法和先辈仪器设备对大年夜鲵虹彩病毒停止了多层次的研究。从大年夜鲵虹彩病毒的生物学特点、大年夜鲵虹彩病毒病的诊断办法及剖断办法的生长、大年夜鲵虹彩病毒病的防控与治疗等方面总结了近十年来研究人员在大年夜鲵虹彩病毒研究上得出的研究成果,并在现有的研究成果的基本长停止扼要的分析。最后,分析了将来大年夜鲵虹彩病毒病的研究前景。

Chinese giant salamander iridovirus (GSIV) disease is the currently only major prion disease, with high infectivity and high mortality. Researchers used modern scientific research methods and advanced instruments and equipment to conduct multilevel research on GSIV. From the biological characteristics of GSIV, the development of diagnostic methods and identification methods for GSIV disease, and the prevention and control of GSIV disease, the authors summarized the research results of researchers in the study of GSIV during the past ten years results, and a brief analysis based on existing research results. Finally, the prospects for the future research on GSIV disease are prospected.

1. 引言

大年夜鲵(Andriasdavidianus),又称娃娃鱼,有尾目(Caudata)隐鳃鲵科(Cryptobranchidae)大年夜鲵属(Andrias),是我国所独有的两栖植物。20世纪90年代以来,随着大年夜鲵人工养殖范围和地区范围的赓续扩大年夜,大年夜鲵病害曾经给国际的大年夜鲵养殖户形成了很多的损掉,严重制约了中国大年夜鲵养殖业的生长。针对大年夜鲵的病害,科研人员展开了一系列的大年夜鲵疾病研究,特别是在细菌性疾病上取得了必定的成果,但是,在大年夜鲵病毒性出血病的研究方面没有明显停顿。

1.1. 中国大年夜鲵虹彩病毒(Chinese Giant Salamander Iridovirus, GSIV)

今朝有关大年夜鲵的病毒性疾病唯一中国大年夜鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus, GSIV)一种,中国大年夜鲵虹彩病毒又被称为中国大年夜鲵病毒(Chinese giant salamander virus, CGSV)、中国大年夜鲵虹彩病毒(Chinese giant salamander iridovirus, GSIV)和大年夜鲵蛙病毒(Andrias davidianus ranavirus, ADRV),固然称呼还没有同一,但都是指招致中国大年夜鲵得病的蛙病毒科的虹彩病毒 [1] [2] 。大年夜鲵虹彩病毒对少小大年夜鲵和成年大年夜鲵都具有感染性,极易迸发养殖大年夜鲵大年夜范围逝世亡,是以,研究人员从大年夜鲵虹彩病毒的病原学动手,在其检测办法、病症诊断和免疫防控等方面展开了全方位的研究。

1.2. 研究中国大年夜鲵虹彩病毒的基本

2009年以来,包含Dong [3] 、江育林等在内的研究员在河南、甘肃、四川等地都分别到了感染中国大年夜鲵的病毒 [4] ,但未肯定感染中国大年夜鲵的是何种病毒。在能精确分别招致大年夜鲵得病病毒的基本上,曾令兵团队与的肖汉兵团队协作,应用实验室先辈的仪器设备与鱼类细胞系资本对得病鱼体内分别的病毒感染细胞培养物停止培养,在得病的少小大年夜鲵与成年大年夜鲵体内分别取得了病毒。经过测序与比对分析,初步将此病毒认定为大年夜鲵虹彩病毒 [5] 。这是世界上第一次从得了典范非细菌性出血病的少小大年夜鲵与成年大年夜鲵体内分别取得大年夜鲵虹彩病毒,这为往后研究大年夜鲵虹彩病毒奠定了重要基本,关于大年夜鲵虹彩病毒各个方面的研究也由此展开。

2. 大年夜鲵虹彩病毒的生物学特点

综合研究大年夜鲵虹彩病毒的生物学特点可为研究大年夜鲵虹彩病毒病的防控技巧供给较为充分的迷信实际根据。

高正勇等 [6] 用56℃和65℃处理大年夜鲵虹彩病毒30 min都可使抱病毒掉去感染活性,注解大年夜鲵虹彩病毒对热处理较为敏感,用酸(pH 3)、碱(pH 10)、无机溶剂乙醚和氯仿处理大年夜鲵虹彩病毒招致病毒滴度出现极明显的差别(p < 0.01),注解大年夜鲵虹彩病毒对pH 3、pH 10和无机溶剂敏感。江育林等 [7] 在电镜下测抱病毒直径为130~150 nm,经过过程对大年夜鲵虹彩病毒的理化特点测定,也证明了该病毒对热、酸、碱和氯仿敏感,并且得出结论大年夜鲵虹彩病毒有囊膜包裹的DNA病毒。孟彦 [8] 不雅察了得病大年夜鲵的肝脏、脾脏和肾脏的超微构造,发明在这些器官内的病毒粒子大年夜多出现六边形,直径约140 nm,对角线约180 nm,出现出典范的虹彩病毒粒子外形(图1)。

J. Ma等 [9] 研究了大年夜鲵虹彩病毒在鲤鱼上皮瘤细胞感染1~96 h的超微构造变更其实不雅察到病毒为二十面体。江育林等 [7] 经过过程在不合温度下将大年夜鲵虹彩病毒置于BF-2 (蓝鳃太阳鱼细胞)、CO (草鱼卵巢细胞)、CHSE (鲑囊胚细胞)、CLC (鲤白血球细胞)、FHM (胖头鱥肌肉细胞)等11个细胞系培养,实验成果注解,病毒在10℃~30℃可以或许在BF-2、CO、CHSE、FHM等细胞中较好地发展且当温度保持在25℃~30℃病毒发展最快。孙建滨、曾令兵等 [10] 用多种终浓度的β-丙内酯(β-propiolactone, BPL)灭活细胞用以培养大年夜鲵虹彩病毒,实验成果显示,在4℃下昔时夜鲵虹彩病毒在终浓度为0.1%的BPL中灭活72 h,该病毒能被完全灭活,这是大年夜鲵虹彩病毒疫苗可以或许用研制的重要的生物学基本。刘丹 [11] 研究发明,大年夜鲵虹彩病毒在感染大年夜鲵后能使得重要组织相容性复合体基因的表达明显变更,重要组织相容性复合体在抗大年夜鲵虹彩病毒的感染中可发挥重要的感化。袁江迪等 [12] 经过过程凝胶电泳分析,比较正常大年夜鲵和感染病毒大年夜鲵的血清和黏液蛋白,证明了大年夜鲵虹彩病毒感染后大年夜鲵血清和黏液蛋白组分会出现变更。张锐等 [13] 对大年夜鲵虹彩病毒的核心基因所编码的蛋白ADRV-96L展开研究,发明ADRV-96L具有促细胞增殖和发展的腺苷三磷酸酶活性,这为往后研究虹彩病毒在高等脊椎植物之间的跨种传播供给了新的偏向。

3. 大年夜鲵虹彩病毒病的诊断及剖断办法

3.1. 大年夜鲵虹彩病毒病的诊断

耿毅等 [14] 对得病大年夜鲵停止解剖不雅察,可见得病大年夜鲵脾、肾肿大年夜伴随淤血和斑点状出血,肝肿胀且呈灰白色或有点状出血,肠壁变薄,肠腔内可见淡黄色积液,应用光镜不雅察,得病大年夜鲵的组织器官有多种炎症反响,应用电镜不雅察,得病大年夜鲵的肝、脾、肾组织细胞产生明显病变,病变的组织细胞质中可看到有虹彩病毒样颗粒。周洲等 [15] 对大年夜鲵感染虹彩病毒的病理特点停止了总结,其重要特点表示为大年夜鲵食欲降低且体表渗出大年夜量黏液,活动量增添,待在池底时间增长;腹部膨大年夜且伴随出血或充血景象,随着感染时间的加长,皮肤、肌肉会出现溃烂,四肢与头部出现肿大年夜并伴随血斑,感染5~10天内大年夜鲵逝世亡。

Figure 1. Observation of Chinese giant salamander iridovirus visions by electron

图1. 电镜下大年夜鲵虹彩病毒不雅察

贾秋红 [16] 在陕西省商洛某大年夜鲵养殖场对得病大年夜鲵治疗时代也对大年夜鲵虹彩病毒病的症状停止了总结,其重要症状有:大年夜鲵头部、四肢及尾部有严重的肿胀及溃烂景象;腹部、下颌有大年夜量出血点;对得病大年夜鲵解剖发明其腹腔内有积水,肝脏、脾脏、肾脏肿大年夜景象且脾肾可见白点。刘丹、耿毅等 [17] 对感染大年夜鲵虹彩病毒的大年夜鲵停止组织静态监测,应用及时荧光定量核酸扩增检测体系检测取得,在感染的过程当中大年夜鲵虹彩病毒在大年夜鲵体内的各个组织广泛分布且含量呈上升趋势。今朝诊断大年夜鲵能否得了大年夜鲵虹彩病毒主如果经过过程现场或许临床症状不雅察、对大年夜鲵停止病理解剖、显微镜不雅察和PCR技巧检测。

3.2. 大年夜鲵虹彩病毒病的剖断

近年来,各研究员与实验室针对大年夜鲵虹彩病毒建立了多种能有效地检测大年夜鲵虹彩病毒的检测办法,并在这些办法上提出了照应的优化筹划。耿毅等 [18] 将得病大年夜鲵的肝、肾、脾等部位做成超薄切片,停止了电子显微镜的不雅察,电镜下可见不应时代的病毒颗粒。沈红保等 [19] 应用浅显PCR的扩增技巧和电泳分析的办法对大年夜鲵虹彩病毒停止简单的检测。实验注解,浅显PCR可以检测出大年夜鲵虹彩病毒,但消费时间长、检测后果不佳,不克不及够精确检测大年夜鲵虹彩病毒。为了改进浅显PCR检测的缺乏,周勇等 [20] 以PCR扩增技巧为基本,应用载体构建重组质粒,以其10倍梯度稀释为标准模板停止Taq Man及时荧光定量PCR扩增,经过过程制造曲线完成定性检测的目标。Taq Man及时荧光定量PCR检测办法可精确快速地检测到大年夜鲵虹彩病毒,具有较高的特异性,但在技巧操作与仪器设备上有比较高的请求。徐敬钧等 [21] 在及时荧光定量PCR检测办法上做出进一步完美,设计了大年夜鲵虹彩病毒的49L名为US22家族基因的ORF区的引物,然后经过过程PCR扩增,此办法在检测上有可反复、可经过过程血液检测的方法完成活体监测等长处。刘星星等 [22] 参照GenBank (DNA序列数据库)对大年夜鲵虹彩病毒的MCP基因序列设计特异性引物,建立巢式PCR检测办法。与Taq Man及时荧光定量PCR测定比拟,巢式PCR检测法不须要昂贵的仪器设备,如荧光定量PCR等,只需浅显PCR便可完成检测,降低费用的同时也更实用于大年夜批量样品检测,更实用于大年夜鲵虹彩病毒的防控阶段。2014年,曾令兵、孟彦等人建立了大年夜鲵虹彩病毒LAMP检测办法,应用此办法制造出能在一个小时内能精确检测样品中能否存在大年夜鲵虹彩病毒的检测试剂盒 [23] 。LAMP检测法的出现使得不具有专业技能的养殖户也能在养殖现场停止快速诊断得病大年夜鲵。王芳等 [24] 建立了套式PCR法用以检测大年夜鲵虹彩病毒并在此基本长停止优化,在临床实验中达到了较好的后果,可以用于大年夜范围的大年夜鲵虹彩病毒检测和隐形感染检测。2016年,周小愿等人将大年夜鲵虹彩病毒重要衣壳蛋白在大年夜肠杆菌BL21中停止融合表达,纯化后制造了多克隆抗体,实验成果注解该多克隆抗体可以用于大年夜鲵虹彩病毒的免疫检测,这使得大年夜鲵虹彩病毒的免疫检测试剂盒的开辟成为能够 [25] 。黄谧等 [26] 异样成功制成了大年夜鲵虹彩病毒的多克隆抗体,为免疫检测试剂盒的研制进一步打下基本。

4. 大年夜鲵虹彩病毒病的防控与治疗

腾空等 [27] 认为惹起大年夜鲵病发的缘由重要有水质变差、大年夜鲵机体遭受机械性毁伤、大年夜鲵种质资本不好等。而关于大年夜鲵虹彩病毒病来讲,其传播速度及致逝世速度都很快,致逝世率能高达90%以上,并且很难在疾病迸发时用药物控制住,是以预防是防止大年夜鲵感染虹彩病毒的关键。周洲 [15] 等认为预防要重视大年夜鲵苗种安康、选择正轨饲料、控制养殖温度与密度、包管水质等。令狐克剑等 [28] 认为控制该病大年夜面积分散最好办法是及时将得病大年夜鲵隔离,并对养殖场、水体及用具停止高锰酸钾消毒。尹文林等 [29] 研究发明,对得病的大年夜鲵应用板蓝根、吗啉胍等药物可以起到减缓病情的后果,但以上药物均没法治愈大年夜鲵虹彩病毒病。

今朝来讲治疗病毒病最有效的手段是打针疫苗。贾秋红等 [14] 在确认大年夜鲵被虹彩病毒感染后,将得病大年夜鲵与安康大年夜鲵停止隔离,应用聚维酮碘和高锰酸钾对水体及相干用具消毒,并对得病大年夜鲵打针大年夜鲵虹彩病毒灭活疫苗和克己的中西药结合抗病毒药物,左右开弓,得病大年夜鲵有所好转,使得疫情取得有效控制。孙建滨等制成的β-丙内酯灭活大年夜鲵虹彩病毒疫苗的免疫保护率可达到83.3% [10] 。邓绿洲 [30] 发明以黄芪多糖为佐剂,可以从必定程度上晋升疫苗保护率。牟维豪等 [31] 应用及时荧光定量核酸扩增检测和病毒滴度测定,用RNA搅扰大年夜鲵虹彩病毒的重要衣壳蛋白及相干酶,发明RNA搅扰可克制病毒重要功能基因的表达并影响病毒复制。

5. 大年夜鲵虹彩病毒病研究展望

在大年夜鲵虹彩病毒出现的十年间,研究员们剥茧抽丝般的研究对使得人们对大年夜鲵虹彩病毒病的懂得日渐晴明,但将来研究员们仍要就若何精确高效治疗大年夜鲵虹彩病毒病做出尽力。起重要抓紧研制可以广泛应用的大年夜鲵虹彩病毒的检测试剂盒。其次大年夜鲵虹彩病毒的疫苗研制仍在临床实验阶段,若何降低疫苗本钱、进步疫苗的免疫保护率也须要各大年夜研究机构持续摸索。另外,中药材的研究开辟也应当作为将来研究大年夜鲵虹彩病毒病的重点冲破偏向,挑选出疗效好的无公害中药材用于大年夜鲵虹彩病毒早期的治疗。往后大年夜鲵虹彩病毒的研究还应整合多方资本,从根源上增添大年夜鲵的感染成绩,为大年夜鲵养殖业的安康生长创造优胜的条件。

文章援用:
苏杭, 江辉. 大年夜鲵虹彩病毒病研究停顿[J]. 水产研究, 2018, 5(2): 45-50. https://doi.org/10.12677/OJFR.2018.52007

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